Il DNA fetale

Nel circolo materno è presente materiale genetico di origine fetale sotto forma di una miscela di frammenti di acidi nucleici aventi due distinte origini: materna e fetale.  La quantità di DNA fetale rilevata nel campione di plasma analizzato rispetto al DNA plasmatico totale (materno + fetale) viene espressa in termini di frazione fetale (FF). Per poter fornire risultati attendibili è necessaria una frazione fetale di almeno il 4%.  Le principali tecniche di sequenziamento utilizzate per l’analisi del cfDNA sono tecniche quantitative di seconda generazione (Next Generation Sequencing - NGS) dell’intero genoma (Massively Parallel Shotgun Sequency - MPSS) o di specifiche regioni (CSS, Chromosome Selective Sequencing). Un approccio alternativo di tipo qualitatitvo è basato sull'analisi dei polimorfismi a singolo nucleotide (Single-nucleotide polymorphysm- SNPs).  Nessuna delle tecniche di analisi del cfDNA attualmente in uso è in grado di fornire una percentuale di falsi positivi (FPR) pari a 0% e sensibilità (DR) del 100%, configurandosi, di fatto, come test di screening e non diagnostici.  Alcune delle applicazioni del cfDNA riguardano l’indagine non invasiva di microdelezioni e altre malattie monogeniche, tuttavia, allo stato attuale non sono disponibili dati sufficientemente validati per porre indicazione al loro utilizzo nella pratica clinica.  Una valutazione ecografica accurata nel primo trimestre dovrebbe essere offerta a tutte le donne che richiedono uno screening prenatale indipendentemente dalla scelta di sottoporsi al test del cfDNA.  L’esito del cfDNA test viene espresso in forma di due possibili risultati per ciascuna delle aneuploidie cromosomiche prese in esame: basso rischio (> 1 su 10.000) o alto rischio (> 99%). Un risultato di basso rischio consente di ridurre il rischio a priori di circa 300 volte per la trisomia 21 e di 50 volte per la trisomia 18 e 13. Un risultato di alto rischio prevede una conferma diagnostica mediante villocentesi o amniocentesi.  In una percentuale variabile tra l’1% e il 5% delle gravidanze, il test del cfDNA può non fornire alcun risultato al primo prelievo. Tentativi successivi forniscono un risultato nel 60-70% dei casi. Il fallimento della metodica nella maggior parte dei casi è attribuibile ad una bassa frazione fetale.  L’implementazione del cfDNA nella pratica clinica può essere realizzata attraverso due possibili percorsi: in sostituzione all’attuale Test Combinato (“screening universale”) oppure come screening di seconda linea dopo Test Combinato (“screening contingente”). Il modello contingente appare il più vantaggioso.